Djamel TAHI<\/strong>: Skupina australsk\u00fdch v\u011bdc\u016f tvrd\u00ed, \u017ee virus HIV, kter\u00fd zp\u016fsobuje AIDS, dosud nikdo neizoloval. Podle nich nebyla pravidla izolace retrovir\u016f v p\u0159\u00edpad\u011b HIV pe\u010dliv\u011b dodr\u017eov\u00e1na. Tato pravidla jsou: kultivace, purifikace materi\u00e1lu ultracentrifugac\u00ed, elektronmikroskopick\u00e9 (EM) fotografie materi\u00e1lu, kter\u00fd tvo\u0159\u00ed p\u00e1sy s hustotou retroviru, charakterizace t\u011bchto \u010d\u00e1stic, d\u016fkaz infek\u010dnosti \u010d\u00e1stic.<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: Ne, to nen\u00ed izolace. Izolaci jsme provedli proto, \u017ee jsme virus “p\u0159edali” d\u00e1l, vytvo\u0159ili jsme kulturu viru. Gallo nap\u0159\u00edklad \u0159ekl: “Oni virus neizolovali… a my (Gallo a kol.) jsme ho donutili, aby se v nesmrteln\u00e9 bun\u011b\u010dn\u00e9 linii objevil v hojn\u00e9m mno\u017estv\u00ed”. Ale p\u0159edt\u00edm, ne\u017e jsme ho nechali vzniknout v nesmrteln\u00fdch bun\u011b\u010dn\u00fdch lini\u00edch, nechali jsme ho vzniknout v kultur\u00e1ch norm\u00e1ln\u00edch lymfocyt\u016f od d\u00e1rce krve.<\/em><\/strong> To je z\u00e1sadn\u00ed krit\u00e9rium. \u010clov\u011bk m\u011bl n\u011bco, co mohl s\u00e9riov\u011b p\u0159ed\u00e1vat, co mohl udr\u017eovat. A charakterizoval se jako retrovirus nejen sv\u00fdmi vizu\u00e1ln\u00edmi vlastnostmi, ale tak\u00e9 biochemi\u00ed, aktivitou RT [reverzn\u00ed transkript\u00e1zy], kter\u00e1 je pro retroviry skute\u010dn\u011b specifick\u00e1. M\u011bli jsme tak\u00e9 reakce protil\u00e1tek proti n\u011bkter\u00fdm protein\u016fm, pravd\u011bpodobn\u011b vnit\u0159n\u00edm protein\u016fm. \u0158\u00edk\u00e1m pravd\u011bpodobn\u011b na z\u00e1klad\u011b analogie s poznatky o jin\u00fdch retrovirech. \u010clov\u011bk by nemohl izolovat tento retrovirus bez znalosti jin\u00fdch retrovir\u016f, to je z\u0159ejm\u00e9.<\/em><\/strong> Domn\u00edv\u00e1m se v\u0161ak, \u017ee jsme odpov\u011bd\u011bli na krit\u00e9ria izolace. Naprosto.<\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: podle n\u011bkolika publikovan\u00fdch odkaz\u016f citovan\u00fdch australskou skupinou nen\u00ed RT specifick\u00fd pro retroviry a nav\u00edc va\u0161e pr\u00e1ce na detekci RT nebyla provedena v purifikovan\u00e9m materi\u00e1lu?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnie<\/strong>r: Mysl\u00edm, \u017ee jsme v Science (kv\u011bten 1983) publikovali gradient, kter\u00fd uk\u00e1zal, \u017ee RT m\u00e1 p\u0159esn\u011b hustotu 1,16. Tak\u017ee \u010dlov\u011bk m\u011bl “peak”, kter\u00fd byl RT. Tak\u017ee \u010dlov\u011bk splnil toto krit\u00e9rium pro purifikaci. Ale p\u0159edat to s\u00e9riov\u011b je obt\u00ed\u017en\u00e9, proto\u017ee kdy\u017e d\u00e1te materi\u00e1l do purifikace, do gradientu, retroviry jsou velmi k\u0159ehk\u00e9, tak\u017ee se navz\u00e1jem rozb\u00edjej\u00ed a zna\u010dn\u011b ztr\u00e1cej\u00ed svou infek\u010dnost.<\/em><\/strong> Ale mysl\u00edm, \u017ee i tak se n\u00e1m poda\u0159ilo zachovat n\u011bco m\u00e1lo z jejich infek\u010dnosti. Ale nebylo to tak snadn\u00e9, jak se to d\u011bl\u00e1 dnes, proto\u017ee mno\u017estv\u00ed viru bylo p\u0159esto velmi slab\u00e9.<\/em><\/strong> Na za\u010d\u00e1tku jsme narazili na virus, kter\u00fd nezab\u00edjel bu\u0148ky. Virus poch\u00e1zel od asymptomatick\u00e9ho pacienta, a tak byl za\u0159azen mezi viry netvo\u0159\u00edc\u00ed syncithia a necytopatogenn\u00ed, pou\u017e\u00edvaj\u00edc\u00edch ko-receptor ccr5 . Jednalo se o prvn\u00ed virus BRU. \u010clov\u011bk ho m\u011bl velmi m\u00e1lo a nemohl ho p\u0159edat v nesmrteln\u00e9 bun\u011b\u010dn\u00e9 lini<\/em><\/strong>i. Zkou\u0161eli jsme to n\u011bkolik m\u011bs\u00edc\u016f, ale neusp\u011bli jsme. S druh\u00fdm kmenem jsme usp\u011bli velmi snadno. Ale v tom spo\u010d\u00edv\u00e1 docela z\u00e1hadn\u00fd probl\u00e9m kontaminace toho druh\u00e9ho kmene t\u00edm prvn\u00edm. To byl LAI.<\/em><\/strong><\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: Pro\u010d v\u00e1mi publikovan\u00e9 EM fotografie poch\u00e1zej\u00ed z kultury, a ne z purifikace?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: Bylo tam tak m\u00e1lo produkce viru, \u017ee nebylo mo\u017en\u00e9 vid\u011bt, co by mohlo b\u00fdt v koncentr\u00e1tu viru v gradientu.<\/em><\/strong> Nebylo tam dost viru, aby se to dalo ud\u011blat. Samoz\u0159ejm\u011b se po n\u011bm p\u00e1tralo, na za\u010d\u00e1tku se hledal ve tk\u00e1n\u00edch, stejn\u011b tak v biopsi\u00edch. N\u011bjak\u00e9 \u010d\u00e1stice jsme vid\u011bli, ale nem\u011bly morfologii typickou pro retroviry. Byly velmi odli\u0161n\u00e9. Relativn\u011b odli\u0161n\u00e9. Tak\u017ee s kulturou trvalo mnoho hodin, ne\u017e jsme na\u0161li prvn\u00ed obr\u00e1zky. Bylo to \u0159\u00edmsk\u00e9 \u00fasil\u00ed!<\/em><\/strong> Je snadn\u00e9 kritizovat po ud\u00e1losti. Co jsme nem\u011bli, a to jsem v\u017edycky uzn\u00e1val, bylo to, \u017ee to byla skute\u010dn\u011b p\u0159\u00ed\u010dina AIDS.<\/em><\/strong><\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: Jak je mo\u017en\u00e9 bez obr\u00e1zk\u016f EM z purifikace zjistit, zda jsou tyto \u010d\u00e1stice virov\u00e9 a zda pat\u0159\u00ed retroviru, nav\u00edc specifick\u00e9mu retroviru?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: No, byly tam sn\u00edmky pu\u010den\u00ed. Zve\u0159ejnili jsme sn\u00edmky pupen\u016f, kter\u00e9 jsou charakteristick\u00e9 pro retroviry. P\u0159esto jen na z\u00e1klad\u011b morfologie nelze \u0159\u00edci, \u017ee by se skute\u010dn\u011b jednalo o retrovirus. Nap\u0159\u00edklad jeden francouzsk\u00fd specialista na EM retrovir\u016f m\u011b ve\u0159ejn\u011b napadl slovy: “Tohle nen\u00ed retrovirus, ale arenavirus”. Proto\u017ee existuj\u00ed i jin\u00e9 \u010deledi vir\u016f, kter\u00e9 maj\u00ed pupeny a hroty na povrchu atd.<\/em><\/strong><\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: Pro\u010d ten zmatek? Na EM sn\u00edmc\u00edch nebyl jasn\u011b vid\u011bt retrovirus?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: V tomto obdob\u00ed byly nejzn\u00e1m\u011bj\u0161\u00ed retroviry typu C, kter\u00e9 byly velmi typick\u00e9. Tento retrovirus nebyl typ C a lentiviry byly m\u00e1lo zn\u00e1m\u00e9. J\u00e1 s\u00e1m jsem ho poznal, kdy\u017e jsem si v knihovn\u011b prohl\u00ed\u017eel obr\u00e1zky viru infek\u010dn\u00ed an\u00e9mie kon\u00ed a pozd\u011bji viru visna. Ale opakuji, nebyla to jen morfologie a pupeny, tam byl RT… byla to sestava t\u011bchto vlastnost\u00ed, kter\u00e1 m\u011b p\u0159im\u011bla \u0159\u00edct, \u017ee je to retrovirus.<\/em><\/strong><\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: Co se t\u00fd\u010de RT, ten byl zji\u0161t\u011bn v kultu\u0159e. Pak n\u00e1sleduje purifikace, p\u0159i kter\u00e9 se najdou retrovir\u00e1ln\u00ed \u010d\u00e1stice. Ale p\u0159i t\u00e9to hustot\u011b je tam spousta dal\u0161\u00edch prvk\u016f, mimo jin\u00e9 t\u011bch, kter\u00e9 se naz\u00fdvaj\u00ed “vir\u016fm podobn\u00e9”.<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: P\u0159esn\u011b tak, p\u0159esn\u011b tak. Chcete-li, nen\u00ed to jedna vlastnost, ale soubor vlastnost\u00ed<\/em><\/strong>, d\u00edky nim\u017e jsme \u0159ekli, \u017ee se jedn\u00e1 o retrovirus z rodiny lentivir\u016f. Vezmeme-li to izolovan\u011b, nen\u00ed ka\u017ed\u00e1 z vlastnost\u00ed skute\u010dn\u011b specifick\u00e1.<\/em><\/strong> Je to jejich soubor. Tak\u017ee jsme m\u011bli: hustotu, RT, obr\u00e1zky pu\u010den\u00ed a analogii s virem visna<\/em><\/strong>. To jsou \u010dty\u0159i vlastnosti.<\/p>\n\n\n\n

Djamel TAH<\/strong>I: Jak ale v\u0161echny tyto prvky umo\u017e\u0148uj\u00ed prok\u00e1zat, \u017ee jde o nov\u00fd retrovirus? N\u011bkter\u00e9 z t\u011bchto prvk\u016f by se mohly vztahovat k jin\u00fdm v\u011bcem, “podobn\u00fdm vir\u016fm”…?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnie<\/strong>r: Ano, a nav\u00edc m\u00e1me endogenn\u00ed retroviry, kter\u00e9 n\u011bkdy exprimuj\u00ed \u010d\u00e1stice – ale endogenn\u00edho p\u016fvodu, a kter\u00e9 tedy nemaj\u00ed patologickou roli, <\/em><\/strong>v \u017e\u00e1dn\u00e9m p\u0159\u00edpad\u011b ne u aids.<\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: Ale jak se pak d\u00e1 rozli\u0161it?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: Proto\u017ee bychom mohli virus “p\u0159edat” d\u00e1l. P\u0159edali jsme aktivitu RT v nov\u00fdch lymfocytech. Z\u00edskali jsme “vrchol” replikace. Sledovali jsme virus. Pr\u00e1v\u011b sestava vlastnost\u00ed n\u00e1s p\u0159im\u011bla \u0159\u00edci, \u017ee se jedn\u00e1 o retrovirus.<\/em><\/strong> A pro\u010d nov\u00fd? Prvn\u00ed ot\u00e1zka, kterou n\u00e1m polo\u017eila p\u0159\u00edroda, zn\u011bla: “Nen\u00ed to laboratorn\u00ed kontaminace? Nen\u00ed to snad my\u0161\u00ed retrovirus nebo zv\u00ed\u0159ec\u00ed retrovirus?”<\/em><\/strong>. Na to se dalo \u0159\u00edci ne! Proto\u017ee jsme prok\u00e1zali, \u017ee pacient m\u011bl protil\u00e1tky proti proteinu sv\u00e9ho vlastn\u00edho viru. Sestava m\u00e1 dokonalou logiku! Je v\u0161ak d\u016fle\u017eit\u00e9 br\u00e1t ji jako asembl\u00e1\u017e. Pokud vezmete ka\u017edou vlastnost zvl\u00e1\u0161\u0165, nejsou specifick\u00e9. Specifi\u010dnost d\u00e1v\u00e1 pr\u00e1v\u011b asambl\u00e1\u017e.<\/em><\/strong><\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: \u010c\u00edm jste kultivoval lymfocyty sv\u00e9ho pacienta? S bun\u011b\u010dnou lini\u00ed H9?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: Ne, proto\u017ee s H9 to v\u016fbec nefungovalo. Pou\u017eili jsme spoustu bun\u011b\u010dn\u00fdch lini\u00ed a jedin\u00e1, kter\u00e1 to dok\u00e1zala produkovat, byly tamponov\u00e9 (!?) lymfocyty.<\/em><\/strong><\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: Kdy\u017e se \u010dlov\u011bk pod\u00edv\u00e1 na zve\u0159ejn\u011bn\u00e9 fotografie z elektronov\u00e9ho mikroskopu, je pro v\u00e1s jako retrovirologa jasn\u00e9, \u017ee jde o retrovirus, nov\u00fd retrovirus?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: Ne, v tuto chv\u00edli to nelze \u0159\u00edci. Na z\u00e1klad\u011b prvn\u00edch sn\u00edmk\u016f pupen\u016f by se mohlo jednat o virus typu C. To se ned\u00e1 rozli\u0161it.<\/em><\/strong><\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI:<\/strong> M\u016f\u017ee to b\u00fdt n\u011bco jin\u00e9ho ne\u017e retrovirus?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: Ne… no, koneckonc\u016f ano… mohl by to b\u00fdt jin\u00fd pupenuj\u00edc\u00ed viru<\/em><\/strong>s. Ale my m\u00e1me atlas. \u010clov\u011bk tak trochu ze zn\u00e1mosti v\u00ed, co je retrovirus a co ne. D\u00edky morfologii se to d\u00e1 rozli\u0161it, ale chce to ur\u010ditou obezn\u00e1menost.<\/em><\/strong><\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: Pro\u010d se neprov\u00e1d\u00ed purifikace?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: Opakuji, \u017ee jsme neprov\u00e1d\u011bli purifikaci.<\/em><\/strong> Purifikovali jsme proto, abychom charakterizovali hustotu RT, kter\u00e1 byla z\u0159eteln\u011b podobn\u00e1 retroviru. Ale nevzali jsme “\u0161pi\u010dku”… nebo to nefungovalo… proto\u017ee kdy\u017e purifikujete, po\u0161kod\u00edte. Tak\u017ee u infek\u010dn\u00edch \u010d\u00e1stic je lep\u0161\u00ed se jich p\u0159\u00edli\u0161 nedot\u00fdkat.<\/em><\/strong> Tak\u017ee jednodu\u0161e vezmete supernatant z kultury lymfocyt\u016f, kter\u00e9 virus vyprodukovaly, a v mal\u00e9m mno\u017estv\u00ed ho d\u00e1te na n\u011bjak\u00e9 nov\u00e9 kultury lymfocyt\u016f. A z toho vypl\u00fdv\u00e1, \u017ee retrovirus p\u0159ed\u00e1v\u00e1te s\u00e9riov\u011b a v\u017edy z\u00edsk\u00e1te stejn\u00e9 vlastnosti a p\u0159i ka\u017ed\u00e9m p\u0159ed\u00e1n\u00ed zv\u00fd\u0161\u00edte produkci.<\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: Ale nast\u00e1v\u00e1 okam\u017eik, kdy je t\u0159eba prov\u00e9st charakterizaci viru. To znamen\u00e1: z jak\u00fdch protein\u016f se skl\u00e1d\u00e1?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: Z jak\u00fdch protein\u016f? To je ono. Tak\u017ee pak anal\u00fdza protein\u016f viru vy\u017eaduje hromadnou v\u00fdrobu a purifikaci. To je nutn\u00e9 ud\u011blat. A tady bych m\u011bl \u0159\u00edct, \u017ee se to \u010d\u00e1ste\u010dn\u011b nepoda\u0159ilo<\/em><\/strong>. To m\u011bl na starosti J. C. Chermann, alespo\u0148 co se t\u00fd\u010de vnit\u0159n\u00edch protein\u016f. A m\u011bl pot\u00ed\u017ee s v\u00fdrobou viru a nefungovalo to. Ale to byla jedna z mo\u017en\u00fdch cest, druh\u00e1 cesta byla m\u00edt nukleovou kyselinu, klonov\u00e1n\u00ed atd. Pr\u00e1v\u011b tento zp\u016fsob fungoval velmi rychle. Jin\u00fd zp\u016fsob nefungoval, proto\u017ee jsme v t\u00e9 dob\u011b m\u011bli syst\u00e9m v\u00fdroby, kter\u00fd nebyl dostate\u010dn\u011b robustn\u00ed. \u010clov\u011bk nem\u011bl dostatek vyroben\u00fdch \u010d\u00e1stic, aby mohl purifikovat a charakterizovat virov\u00e9 proteiny. To se nedalo ud\u011blat. V t\u00e9 dob\u011b nebylo mo\u017en\u00e9 vyrobit velk\u00e9 mno\u017estv\u00ed viru, proto\u017ee tento virus nevznikl v nesmrteln\u00e9 bun\u011b\u010dn\u00e9 linii.<\/em><\/strong> Mohli jsme to ud\u011blat s virem LAI, ale v t\u00e9 dob\u011b jsme to nev\u011bd\u011bli.<\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: Gallo to ud\u011blal?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: Gallo? Nev\u00edm, jestli to opravdu purifikoval. Nev\u011b\u0159\u00edm, \u017ee ano. Mysl\u00edm, \u017ee se velmi rychle pustil do molekul\u00e1rn\u00ed \u010d\u00e1sti, tedy do klonov\u00e1n\u00ed<\/em><\/strong>. Co ale ud\u011blal, je Western Blot. Pou\u017e\u00edvali jsme techniku RIPA, tak\u017ee to, co ud\u011blal nov\u00e9ho, bylo, \u017ee uk\u00e1zal n\u011bkter\u00e9 proteiny, kter\u00e9 \u010dlov\u011bk p\u0159i jin\u00e9 technice dob\u0159e nevid\u011bl. Zde je dal\u0161\u00ed aspekt charakterizace viru. Nem\u016f\u017eete ho purifikovat, ale pokud zn\u00e1te n\u011bkoho, kdo m\u00e1 protil\u00e1tky proti protein\u016fm viru, m\u016f\u017eete komplex protil\u00e1tka\/antigen purifikovat.<\/em><\/strong> To je to, co jeden z nich ud\u011blal. A tak se z\u00edskal viditeln\u00fd p\u00e1s, radioaktivn\u011b zna\u010den\u00fd, kter\u00fd se naz\u00fdv\u00e1 protein 25, p25. A Gallo vid\u011bl dal\u0161\u00ed. Byl tam p25, kter\u00fd nazval p24, byl tam p41, kter\u00fd jsme vid\u011bli…<\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: Pokud jde o protil\u00e1tky, \u010detn\u00e9 studie uk\u00e1zaly, \u017ee tyto protil\u00e1tky reaguj\u00ed s jin\u00fdmi proteiny nebo prvky, kter\u00e9 nejsou sou\u010d\u00e1st\u00ed HIV. A \u017ee nemohou sta\u010dit k charakterizaci protein\u016f HIV.<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: Ne! Proto\u017ee jsme m\u011bli kontroly. M\u011bli jsme lidi, kte\u0159\u00ed nem\u011bli AIDS a nem\u011bli protil\u00e1tky proti t\u011bmto protein\u016fm. A techniky, kter\u00e9 jsme pou\u017eili, byly techniky, kter\u00e9 jsem s\u00e1m zdokonalil o n\u011bkolik let d\u0159\u00edve, k detekci genu src. V\u00edte, gen src byl detekov\u00e1n tak\u00e9 imunoprecipitac\u00ed. Byl to p60 [protein 60]. Byl jsem velmi zru\u010dn\u00fd, a m\u016fj technik tak\u00e9, s technikou RIPA. Pokud \u010dlov\u011bk z\u00edsk\u00e1 specifickou reakci, je to specifick\u00e9.<\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: Ale v\u00edme, \u017ee pacienti s AIDS jsou infikov\u00e1ni mno\u017estv\u00edm dal\u0161\u00edch infek\u010dn\u00edch agens, kter\u00e1 jsou n\u00e1chyln\u00e1 k vyvol\u00e1n\u00ed zk\u0159\u00ed\u017een\u00fdch reakc\u00ed.<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: Ano, ale protil\u00e1tky jsou velmi specifick\u00e9. Um\u00ed rozli\u0161it jednu molekulu z milionu.<\/em><\/strong> Existuje velmi velk\u00e1 afinita. Kdy\u017e maj\u00ed protil\u00e1tky dostate\u010dnou afinitu, vylov\u00edte n\u011bco opravdu velmi specifick\u00e9ho. S monoklon\u00e1ln\u00edmi protil\u00e1tkami vylov\u00edte opravdu JEDEN protein. To v\u0161e se pou\u017e\u00edv\u00e1 pro diagnostickou detekci antigen\u016f.<\/em><\/strong><\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: Pro v\u00e1s p41 nebyl virov\u00e9ho p\u016fvodu, a tak nepat\u0159il k HIV. Pro Galla to byl nejspecifi\u010dt\u011bj\u0161\u00ed protein HIV. Pro\u010d tento rozpor?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: Oba jsme m\u011bli vcelku pravdu<\/em><\/strong>. To znamen\u00e1, \u017ee jsem p\u0159i sv\u00e9 technice RIPA… v podstat\u011b existuj\u00ed bun\u011b\u010dn\u00e9 proteiny, se kter\u00fdmi se \u010dlov\u011bk setk\u00e1 v\u0161ude – je tam nespecifick\u00fd “\u0161um pozad\u00ed”<\/em><\/strong>, a mezi t\u011bmito proteiny je jeden, kter\u00fd je v bu\u0148k\u00e1ch velmi hojn\u00fd, a to je aktin. A tento protein m\u00e1 molekulovou hmotnost 43000kd. Tak\u017ee tam byl. Tak\u017ee jsem m\u011bl p\u0159im\u011b\u0159en\u011b pravdu, ale to, co Gallo vid\u011bl na druh\u00e9 stran\u011b, byl gp41 HIV, proto\u017ee pou\u017e\u00edval Western Blot. A to jsem uznal.<\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: Pro v\u00e1s byl p24 nejspecifi\u010dt\u011bj\u0161\u00edm proteinem HIV, pro Galla v\u016fbec ne. \u010clov\u011bk d\u00edky jin\u00fdm studi\u00edm poznal, \u017ee protil\u00e1tky nam\u00ed\u0159en\u00e9 proti p24 se \u010dasto nach\u00e1zely u pacient\u016f, kte\u0159\u00ed nebyli naka\u017eeni HIV, a dokonce i u n\u011bkter\u00fdch zv\u00ed\u0159at. Ve skute\u010dnosti je dnes protil\u00e1tkov\u00e1 reakce s p24 pova\u017eov\u00e1na za nespecifickou.<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: Nen\u00ed dosta\u010duj\u00edc\u00ed<\/em><\/strong> pro diagnostiku infekce HIV.<\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: \u017d\u00e1dn\u00fd protein nen\u00ed dosta\u010duj\u00edc\u00ed.<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: \u017d\u00e1dn\u00fd protein nen\u00ed dostate\u010dn\u00fd<\/em><\/strong>. Ale v t\u00e9 dob\u011b se probl\u00e9m takto neprojevil. Probl\u00e9mem bylo zjistit, zda se jedn\u00e1 o HTLV, nebo ne. Jedin\u00fd zn\u00e1m\u00fd lidsk\u00fd retrovirus byl HTLV. A my jsme jasn\u011b uk\u00e1zali, \u017ee to nen\u00ed HTLV, \u017ee Gallovy monoklon\u00e1ln\u00ed protil\u00e1tky proti p24 HTLV nerozpoznaly p25 HIV.<\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: P\u0159i hustot\u011b retrovir\u016f, 1,16, je jich hodn\u011b.<\/p>\n\n\n\n

\u010d\u00e1stic, ale pouze 20 % z nich pat\u0159\u00ed HIV. Pro\u010d 80 % protein\u016f nen\u00ed virov\u00fdch a ostatn\u00ed ano? Jak se to d\u00e1 rozli\u0161it?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: Existuj\u00ed dv\u011b vysv\u011btlen\u00ed. Jednak p\u0159i t\u00e9to hustot\u011b m\u00e1te tzv. mikrovezikuly bun\u011b\u010dn\u00e9ho p\u016fvodu, kter\u00e9 maj\u00ed p\u0159ibli\u017en\u011b stejnou velikost jako virus, a pak virus s\u00e1m p\u0159i pu\u010den\u00ed p\u0159in\u00e1\u0161\u00ed bun\u011b\u010dn\u00e9 proteiny. Tak\u017ee efektivn\u011b tyto proteiny nejsou virov\u00e9, ale bun\u011b\u010dn\u00e9ho p\u016fvodu.<\/em><\/strong> Jak tedy zjistit rozd\u00edl?! Up\u0159\u00edmn\u011b \u0159e\u010deno, touto technikou to nelze ud\u011blat p\u0159esn\u011b.<\/em><\/strong> Co m\u016f\u017eeme ud\u011blat, je maxim\u00e1ln\u011b purifikovat virus pomoc\u00ed postupn\u00fdch gradient\u016f, a v\u017edy naraz\u00edte na stejn\u00e9 proteiny<\/em><\/strong>.<\/p>\n\n\n\n

Djamel TAHI<\/strong>: Ostatn\u00ed zmiz\u00ed?<\/p>\n\n\n\n

Luc Montagnier<\/strong>: \u0158ekn\u011bme, \u017ee ostatn\u00ed se trochu zmen\u0161\u00ed. Sn\u00edm\u00e1te mikrovezikuly, ale poka\u017ed\u00e9 ztrat\u00edte hodn\u011b viru, tak\u017ee je nutn\u00e9 m\u00edt hodn\u011b viru na za\u010d\u00e1tku, abyste si trochu zachovali, kdy\u017e dojdete na konec. A pak je to op\u011bt molekul\u00e1rn\u00ed<\/em><\/strong><\/p>\n\n\n\n

anal\u00fdza, tedy sekvence t\u011bchto protein\u016f, kter\u00e1 umo\u017en\u00ed \u0159\u00edci, zda jsou virov\u00e9ho p\u016fvodu, \u010di nikoli. <\/em><\/strong>S t\u00edm jsme za\u010dali u p25, to se nepoda\u0159ilo<\/em><\/strong>… a dal\u0161\u00ed technikou je klonov\u00e1n\u00ed, tak\u017ee pak m\u00e1te DNA a z DNA z\u00edsk\u00e1te proteiny. Odvod\u00edte sekvenci protein\u016f a jejich velikost a, op\u011bt naraz\u00edte na to, co jste ji\u017e pozorovali pomoc\u00ed imunoprecipitace nebo pomoc\u00ed gelov\u00e9 elektrofor\u00e9zy. A \u010dlov\u011bk v\u00ed, \u017ee analogicky s velikost\u00ed protein\u016f jin\u00fdch retrovir\u016f lze tyto proteiny pom\u011brn\u011b p\u0159esn\u011b odvodit.<\/em><\/strong> Tak\u017ee m\u00e1te p25, kter\u00fd byl bl\u00edzk\u00fd p24 HTLV, m\u00e1te p18.. nakonec m\u00e1te ostatn\u00ed. Na druhou stranu ten, kter\u00fd byl velmi odli\u0161n\u00fd, byl velmi velk\u00fd protein, p120.<\/p>\n\n\n\n